当前位置:
www.0119.com > 酒石酸 >

碱性酒石酸铜滴定法(王光亚)

2019-08-15| 发布者: nkszhn| 查看: | 评论: 0

  碱性酒石酸铜滴定法 本方式合用于保健食物中粗多糖的测定。 1.方式撮要 样品多糖沉淀物经酸解后,全数转成单糖,单糖具还原性,正在加热前提下间接滴 定标定过的碱性酒石酸铜液, 以亚甲蓝做剂,按照样品液耗损的体积计较还 原糖含量,再乘以换算系数 0.9 计较多糖含量。 2.仪器 (1)离心计心情:4000r/min。 (2)离心瓶容量 100mL 或具盖 10mL 离心管。 (3)水解瓶:500mL 带冷凝回流安拆。 (4)电炉:1000W。 (5)pH 计。 (6)水浴锅。 3.试剂 尝试用水为双蒸水,所用试剂为阐发纯级。 (1)碱性酒石酸铜甲液:称取硫酸铜(CuSO4?5H2O)15g,亚甲蓝(次甲基蓝) 0.05g,加水消融,并稀释至 1000mL。 (2)碱性酒石酸铜乙液:称取 50g 酒石酸钾钠及 75g 氢氧化钠,溶于水中,再 插手 4g 亚铁氰化钾,完全消融后,用水稀释至 1000mL 储存于橡胶塞玻璃瓶内。 (3)无水乙醇。 (4)浓盐酸。 (5)40%氢氧化钠。 (6)葡萄糖尺度液:精确称取 1.0000g 颠末 98~100℃干燥至恒沉的阐发纯葡萄 糖,加水消融后,并以水稀释至 1000mL 此溶液 1mL 含 1mg 葡萄糖,现用现配。 4.测定步调 (1)样品处置: a.胶囊、片剂、粉剂、颗粒等(不含淀粉)的样品:精确称取平均研碎的样品粉 末 3~5g,置于 100mL 的离心瓶中,加 15mL 热水(温度90℃)搅拌曲至消融 无沉淀物为止,如样品难溶,可正在滚水浴中加热 30min 后过滤,定容。取此待测 液 15mL 加 75mL 无水乙醇搅拌平均(若只要 10mL 离心管,则每管插手 1.5mL 样品溶液,后加 7.5mL 无水乙醇,加盖频频倾倒管子数次) 。正在离心计心情中以 4000r/min 离心 10min,并小心弃去上清液,再加 15mL 热水(温度90℃)冲刷 离心瓶中沉淀物,或用 1.5mL 热水冲刷离心管中沉淀物,反复一次后再以 4000r/min 离心 10min,小心地用吸管将上层液体吸去。 用玻璃棒或小羹匙将沉淀物取出并转移至 500mL 酸水解瓶底部,取 50mL 热水 (温度90℃) , 此中部门用来冲刷离心瓶或离心管壁中残剩的沉淀物, 将沉淀物 一并转移至 500mL 酸水解瓶中,插手 15mL 浓盐酸于酸水解瓶中,冷凝水, 正在滚水浴中加热 2h,冷却,然后先用 40%的氢氧化钠粗调,后用稀的氢氧化钠 细调,再置于 pH 计上调整 pH 正在 6.8~7.2 之间, (不要用 pH 纸调试) 。 将已中和的酸解液转移至 100~250mL 容量瓶中 (视糖浓度而定) , 加水定容 (V1) 。 用滤纸过滤,滤液为待测液。 b.口服液样品:精确吸收平均样品溶液 15mL 于 100mL 的离心瓶中,或 1.5mL 于 10mL 离心管中,同上操做。 c.胶囊、片剂、粉剂、颗粒等(含淀粉)的样品:精确称取 2g 平均研碎的样品 粉末,置于 100mL 的具塞锥形瓶中,加 50mL 热水(90℃)消融,正在滚水浴中 加热 15min, 使淀粉糊化, 冷却至 60℃以下。 加 1.0mL10%的淀粉酶溶液, 加 0.5mL 乙酸钠缓冲液(pH7.4) ,加塞,于 55~60℃保温 1h,两头间歇搅拌(取 1 滴上清 液用碘液查验能否完全水解。若呈蓝色,再加淀粉酶溶液并继续保温,曲至酶解 液加碘液后不呈蓝色为止) ,加热至沸(使酶失活) ,然后再插手 1%的葡萄糖酶 正在 37℃温箱中,保温 24h 使淀粉全数酶解成葡萄糖。再移样液于蒸发皿中,并 正在滚水浴中稍浓缩,放冷,小心将样液转入 25mL 容量瓶中,用水洗容器,并定 容至刻度,过滤。 然后按上法用无水乙醇沉淀多糖, 并用 85%的乙醇洗沉淀物 2 次, 将沉淀物酸解 中和、定容后待测。 (2)标定碱性酒石酸铜液: a.用定量移液管吸收碱性酒石酸铜甲、 乙液各 5mL 于 150mL 的锥形瓶中, 加 10mL 蒸馏水及数粒玻璃珠。 b.用滴定管插手 9.0mL 尺度葡萄糖溶液于锥形瓶中, 并将锥形瓶置电炉上敏捷加 热, 务必正在 2min 内至沸, 并连结溶液正在微沸的形态下再用尺度葡萄糖溶液滴定, 待溶液颜色变浅时,以每 2s1 滴的速度滴至蓝色刚退去为起点,记实耗损尺度葡 萄糖溶液的体积,同时平行操做 3 次,取其平均值(VG) 。 (3)样品溶液的预测: a.按 4(2)a 操做。 b.将锥形瓶置电炉上敏捷加热,务必正在 2min 内至沸,并连结溶液正在微沸的形态 下,从滴定管中滴加样品溶液,待溶液颜色变浅时,以 2s1 滴的速度滴至蓝色刚 退去为起点,记实样液耗损体积即为预测体积。 (4)样品测定: a.按 4(2)a 操做。 b.从滴定管中滴加比预测体积少 1.0mL 的样品溶液,将锥形瓶置电炉上敏捷加 热,务必正在 2min 内至沸,并连结溶液正在微沸的形态下,从滴定管中滴加样品溶 液,待溶液颜色变浅时,以 2s1 滴的速度滴至蓝色刚退去为起点,记实样液耗损 的总体积,同时平行操做 3 次,取其平均值(V2) 。 5.成果计较 VG×c×V1 样品中粗多糖的含量= ×0.9×100% m×V2×1000 式中:VG——标定 10mL 碱性酒石酸铜液(甲、乙各 5mL)耗损尺度葡萄糖溶 液 mL 数; c——尺度葡萄糖溶液的浓度(mg/mL) ; m——样质量量(g) ; V1——酸解液中和后定容的体积(mL) ; V2——测按时平均耗损样品溶液体积(mL) ; 1000——mg 换算成 g; 0.9——还原糖换算成多糖的系数。 计较举例: 灵芝胶囊 (灵芝粉) 称 3.9080g 于 100mL 离心瓶中, 加 15mL 热水消融, 加 75mL 无水乙醇沉淀多糖,将沉淀物酸解后,调 pH 至 6.8~7.2,用水定容至 250mL。 滴定 10mL 碱性酒石酸铜液(甲、乙液各 5mL)耗样品液 8.02mL。 尺度葡萄糖溶液的浓度为 1.0mg/mL。 10mL 碱性酒石酸铜液耗损尺度葡萄糖溶液的体积为 10.90mL。 10.90×1.0×250 粗多糖= ×0.9×100%=7.82% 3.9080×8.02×1000 6.回滴法 如样品含糖量少或水解后溶液颜色太深,影响起点察看误差较大时,可采用回滴 法,操做同 4(2) 。但将加水 10mL 及尺度葡萄糖溶液 9.0mL 改为加样品水解液 20mL,然后用尺度葡萄糖溶液滴定至起点(预试) ,正式尝试时可先加比预试少 1mL 的尺度葡萄糖液于锥形瓶中,如上法测定,记实尺度葡萄糖液的总耗量 (Vg) 。 计较公式同上:式中 VG 用 VGˊ暗示。 VGˊ=(VG—Vg) 计较举例: 样品 4.3280g 溶于热水,放冷并定容至 25mL,取 1.5mL 于 10mL 具塞试管中, 加 7.5mL 无水乙醇沉淀多糖,将沉淀物酸解后,调 pH,用水定容至 100mL。 测定 样 液 用 葡 萄 糖 液 葡萄糖液回滴用量/mL 量 加 入 量 粗略 用量 1 用量 2 用量 3 平均 总耗量 /mL /mL 预试 20 9.70 正试 20 8.70 0.63 0.60 0.60 0.61 9.31 尺度葡萄糖溶液的浓度为 1.0mg/mL, 10mL 碱性酒石酸铜液耗损尺度葡萄糖溶液 的体积为 10.90mL: (10.90-9.31)×1.0×100×25 粗多糖= ×0.9×100%=2.75% 4.3280×20×1.5×1000 7.正文 (1)保健食物中糖的品种良多,欲测定样品中多糖的含量,可先将样品溶于热 水, 后用 5 倍容量的无水乙醇将多糖沉淀,经离心分手后除去水溶性的单糖及低 聚糖,再用热水冲刷沉淀物,反复沉淀-分手步调,获得活性多糖。 分手后的多糖可用盐酸水解,过滤后用碱性酒石酸铜滴定法测定其还原糖含量, 再换算成多糖含量。 用热水消融多糖沉淀物,并用苯酚-硫酸法或蒽酮-硫酸法以葡萄糖为对照品用分 光光度法测定。 (2)为了削减尝试误差,正在操做时应严酷恪守所的操做前提,留意热源强 度(电炉功率) 、锥形瓶规格、加热时间、滴定速度的分歧性。 (3)保健食物中样液多为有色溶液,可采用回滴法。回滴法因尺度糖溶液浓度 是已知的,所以起点更容易节制,但正在正式滴定前,必然要进行预测,以确定加 入尺度葡萄糖溶液的量,同时能够控制操做前提。 (4)加热至沸后,用尺度葡萄糖溶液滴定至起点时,尺度液的用量必需节制正在 0.5~1.0mL 之间,平行测定相差不跨越 0.1mL,不然应再反复滴定。 (5)亚甲蓝被糖还原为无色,暗示起点达到,但取空气接触又可被氧化为蓝色, 所以必然要连结正在微沸形态下(防止空气进入滴定) 。具体操做时可将石棉网中 的石棉部门平放正在电炉的一半,调理好酸式滴定管的高度,电炉先通电待温 度恒定后才加热, 并用烧瓶夹固定锥形瓶,置电炉上敏捷加热至沸后再将锥形瓶 移于另一半有石棉网的电炉上继续加热,如许可避免把锥形瓶从热源上取下,并 连结正在微沸形态下滴定,并且便利起点察看。 (6)淀粉酶的水解具有性,它只水解淀粉而不会水解其它多糖,正在淀粉酶 的感化下, 使淀粉水解成低糊精和麦芽糖,再正在葡萄糖酶的感化下变成葡萄 糖。酶的用量应按照酶活力而定。 (7) 脂肪的存正在会妨碍酶对淀粉的感化及可溶性糖类的去除,故使用脱脂, 如样品中脂肪含量较少,可省略此步。 (8)多糖-还原糖换算系数 F 值之计较注释: H+ C12H22O11+H2O 2C6H12O6 (双糖) (还原糖) H+ C18H32O16+2H2O 3C6H12O6 (三糖) (还原糖) H+ ∴ C6nH(10n+2)O(6n+1)+(n-1)H2O nC6H12O6

  碱性酒石酸铜滴定法(王光亚)_西医中药_医药卫生_专业材料。碱性酒石酸铜滴定法 本方式合用于保健食物中粗多糖的测定。 1.方式撮要 样品多糖沉淀物经酸解后,全数转成单糖,单糖具还原性,正在加热前提下间接滴 定标定过的碱性酒石酸铜液, 以亚甲蓝做剂,按照样品液


Copyright 2018-2020 www.0119.com 版权所有 未经授权,严禁转载,违者将被追究法律责任。